Definiowanie nowej fosfoproteiny o wielkości 75 kDa związanej z SS-A / Ro i identyfikacja różnych ludzkich autoprzeciwciał

Matki dzieci z toczniem rumieniowatym noworodkowym (NLE) i blokiem serca, a także pacjenci z zespołem Sjögrena (SS) i toczniem rumieniowatym układowym, mają autoprzeciwciała w surowicy, które rozpoznają autoantygeny SS-A / Ro, w tym rybonukleoproteinę 60 kDa. Dwuwęglowym badaniem drożdżowym zidentyfikowaliśmy nowe białko 75 kDa (pp75), które oddziałuje z karboksylem 70% 60-kDa SS-A / Ro. Specyficzność interakcji potwierdzono przy użyciu ssaczych 2-hybrydowych i chemicznych badań sieciowania. Immunoprecypitacja radioznakowanymi ekstraktami komórek HeLa wykazała, że pp75 był fosforylowany i związany z 2 innymi fosfoproteinami o masie 64 kDa. W analizie Northern blot wyrażono pp75 we wszystkich analizowanych tkankach; najwyższa ekspresja była w ludzkim sercu. Opierając się na immunofluorescencji transfekowanych komórek HeLa, pp75 lokalizuje się głównie w cytoplazmie, co jest potwierdzone przez immunohistochemię w nietransfekowanych komórkach. W oparciu o testy Western blot i ELISA, surowice od 14 z 84 matek dzieci z rozpoznanym NLE pp75, w tym matka, u której nie wykryto przeciwciał anty-SS-A / Ro. Ponadto surowice od 5 z 80 pacjentów z SS były pozytywne dla przeciwciała anty-pp75. Identyfikacja partnerów molekularnych jest pierwszym krokiem w kierunku wyjaśnienia funkcji i możliwego zaangażowania w patogenezę długo rozpoznawanych autoantygenów, takich jak 60-kDa SS-A / Ro, które są obecnie słabo poznane. Wprowadzenie Obecność przeciwciał anty-SS-A / Ro w surowicach matek, których dzieci mają objawy skórne i skórne u noworodkowego tocznia rumieniowatego (NLE) jest prawie powszechna (1. 3). Przeciwciała SS-A / Ro zostały wyeluowane z zajętego serca płodowego, co sugeruje, że przeciwciała te mogą uczestniczyć w zdarzeniu patogenicznym (4). Przeciwciała matki są aktywnie transportowane przez łożysko we wczesnym drugim trymestrze ciąży. W krążeniu płodowym przeciwciała te mogą inicjować zapalenie mięśnia sercowego, które trwale uszkadza system przewodzenia serca. Klinicznie, matki dzieci z NLE mogą mieć układowy toczeń rumieniowaty (SLE) lub zespół Sjögrena (SS), ale wiele z nich jest całkowicie bezobjawowych i są identyfikowane tylko przez narodziny chorego dziecka (2). Przeciwciała SS-A / Ro można również znaleźć w surowicach od pacjentów ze SLE (35%) i SS (60%) (5). Przeciwciała anty-SS-A / Ro rozpoznają białka 52-kDa i 60-kDa SS-A / Ro (6). Białko o masie cząsteczkowej 60 kDa jest dominującym składnikiem rodziny mało obfitych cząstek rybonukleoproteiny (RNP) zawierających małe cytoplazmatyczne RNA znane jako hY1-5 (7, 8). Te Ro lub hY RNP są heterogenne biochemicznie i immunologicznie (9). CDNA dla ludzkich antygenów SS-A / Ro 60-kDa analizowano w kilku laboratoriach (10, 11). Sekwencja aminokwasów SS-A / Ro o masie 60 kDa jest ogólnie konserwatywna wśród różnych gatunków (12. 14). Jest członkiem rodziny białek wiążących RNA z sekwencją konsensusową wiążącą RNA w domenie końca NH2. Ostatnie dane wskazują, że antygen występuje w co najmniej 2 formach pochodzących z alternatywnego składania mRNA: 60. i 60 .. . i . są alternatywnymi łączonymi produktami, różniącymi się użyciem ostatniego eksonu. Dominującą postacią jest 60 (3, co do którego wykazano, że wiąże się z hY-RNA bezpośrednio w teście rekonstytucji in vitro (11). Subkomórkowa lokalizacja SS-A / Ro była kontrowersyjna, a różne badania wykazały obecność białka 60 kDa i 52 kDa w przedziałach cytoplazmatycznych lub jądrowych (9). Te rozbieżne obserwacje mogą być wtórne do różnych warunków fizjologicznych obecnych w analizie, jak również do różnych typów komórek. Kompleksy RNP mogą dysocjować w cytoplazmie i ponownie składać się w nukleoplazmie (15). Niespecjalnie związany z RNA 60-kDa SS-A / Ro występuje głównie w jądrze (9)
[podobne: zakrzepica żył objawy, xenobot crack, zaburzenie afektywne dwubiegunowe ]