dentysta chirurg koszalin

Usunięty motyw QQLS jest wysoce konserwatywny wśród gatunków i innych transporterów glukozy. Badania funkcjonalne transporterów WT i mutantów Q282_S285del GLUT1 Aby udowodnić jego funkcjonalną przydatność, wprowadziliśmy c.1022_1033del do cDNA GLUT1 i eksprymowaliśmy transportery WT i zmutowane w oocytach Xenopus. Równe ilości cRNA albo WT albo zmutowanego genu zostały wstrzyknięte i wszystkie eksperymenty przeprowadzono równolegle, aby uniknąć jakiegokolwiek odchylenia między WT i zmutowanymi transporterami (patrz Metody dodatkowe). Najpierw zmierzono wychwyt 3-O-metylo-d-glukozy przy użyciu wcześniej opublikowanego protokołu (15). Wychwyt glukozy był znacznie zmniejszony w przypadku Q282_S285del w porównaniu z transporterami WT (rysunek 3A). Kiedy określiliśmy tempo wychwytu glukozy w erytrocytach od pacjentów w porównaniu z dawką z prawidłowych kontroli, stwierdziliśmy znaczące zmniejszenie dla pacjentów (P <0,05, Figura 3B). Zgodnie z oczekiwaniami różnica między pacjentami i kontrolami była mniej wyraźna niż między mutantami i transporterami WT w oocytach, ponieważ pacjenci nosili WT allele kodujące normalnie działające transportery, które ulegają ekspresji w erytrocytach. Rysunek 3 Badania funkcjonalne. (A) Zmniejszony wychwyt glukozy zarejestrowany w oocytach, którym wstrzyknięto mutant w porównaniu z cRNA WT. Pokazano reprezentatywne wyniki zarejestrowane z 3 x 10 oocytów dla każdego punktu danych. * P <0,05, ** P <0,01. (B) Absorpcja glukozy oznaczona w 4 ładunkach erytrocytów od 3 pacjentów z rodziny PED1 niosących mutację Q282_S285del (III-2, IV-1, IV-2, wskaźnik pacjenta III-2 mierzono dwukrotnie i obaj jego synowie raz każdy) i 10 ładunków z różnych normalnych kontroli. Wykreślany jest logarytm ln (1 ct / cq), przy czym ct jest asymilowaną radioaktywnością po czasie t i ceq w równowadze (po 25 minutach), w funkcji czasu dając liniową funkcję. Średnie wartości nachylenia liniowych pasowań w kontrolach wynosiły 0,0280. 0,0018 s 1 i u pacjentów. 0,0201. 0,0006 s 1 (P <0,05). Słupki błędów są mniejsze niż rozmiar symbolu dla pacjentów. (C i D) Używając elektrod jonoselektywnych, [Na +] i i [K +] i rejestrowano w oocytach, wstrzyknięto, jak wskazano. [Na +] i był zwiększony, a [K +] i zmniejszył się w przypadku mutanta w porównaniu z transporterami WT. n = 6 dla każdej grupy; P <1 x 10 <6 (mutant versus WT), P <1 x 10 ~ 7 (mutant versus H2O) (C); n = 4-5, P <0,001 (mutant versus WT i H2O) (D). Wartości P obliczono na podstawie potencjalnych różnic między elektrodą jonoselektywną a elektrodą konwencjonalną. Dlatego słupki błędu nie są wyświetlane dla obliczonych stężeń jonów (patrz Metody dodatkowe). (E) Eksperymenty z przepływem 86Rb + w oocytach wykazują zwiększone wartości dla mutacji w porównaniu z WT. Pokazane są wartości z 3 × 8 oocytów dla każdego warunku. ** P <0,01. (F) Zwiększony przepływ 86Rb + wykazano również w erytrocytach od 3 pacjentów (III-2, IV-1, IV-2) w porównaniu z erytrocytami z 11 normalnych kontroli. *** P <0,001. Przedstawiono reprezentatywne eksperymenty z poszczególnych partii oocytów (A i C = E). Indywidualne wartości (C. F) i średnia. Pokazano SEM (słupki błędu w A, B, E i F). Ponieważ zmiany jonowe obserwowane w erytrocytach mogą być bezpośrednio indukowane przez zmutowany transporter, przeprowadziliśmy eksperymenty elektrofizjologiczne w oocytach. Potencjał spoczynkowej błony został zdepolaryzowany (Q282_S285del, A 192 2 mV, WT, A 43 2 2 mV, H2O, A39 <4 mV, n = 10; P <0,0001), a rezystancja wejściowa została znacznie zmniejszona (Q282_S285del, 0,14. 0,04 M ., WT, 1,60. 0,26 M ., H20, 1,93. 0,31 M .; n = 10; P <0,0001) dla oocytów, którym wstrzyknięto zmutowane cRNA w porównaniu z tymi, którym wstrzyknięto cRNA WT lub wodę, jak ujawniono w 2 -mikroelektrodowe napinanie napięcia [patrz też: zapalenie ucha u dziecka objawy, zespół aspergera test, zespół fallota ]