endokrynolog w bydgoszczy

Analiza dotyczyła IFN-y ex vivo odpowiedzi na pule peptydów HA i NA H3N2 i wszystkich białek wewnętrznych H5N1. Respondenci, którzy nie byli w stanie dostarczyć próbek świeżej krwi do badania zubożenia, zostali wyłączeni z tej analizy. Rozpoznanie komórek docelowych zakażonych przez rVACV wyrażające H5N1 M1 lub NP. W celu dalszego zbadania funkcji efektorowych powyższych limfocytów T, ustalono 10 linii komórek T CD4 + i 10 CD8 + ze zdrowych osób w Wielkiej Brytanii, wykorzystując immunodominujące regiony epitopów komórek T H5N1 w teście ELISpot ex vivo (Tabela 3). ). Dodatkowe 7 regionów epitopu H3N2, których peptydy równoważne H5N1 nie zostały rozpoznane krzyżowo, wybrano jako kontrole. Swoistość antygenowa i zależność CD4 / CD8 każdej linii komórek T została potwierdzona przez IFN-y. ELISpot i wewnątrzkomórkowe barwienie cytokin (ICS) (dane nie przedstawione). Ponadto linie komórkowe T poddano wstępnej kontroli przez IFN-y. ICS ze względu na ich zdolność rozpoznawania autologicznych komórek docelowych zakażonych ludzkimi wirusami grypy A (podsumowanie przedstawione w Tabeli 3). Specyficzne dla peptydu klony komórek T CD4 + i CD8 + wytworzono z większości ustalonych linii komórek T przez ograniczenie rozcieńczenia. Tabela 3 Linie komórek T CD4 + i CD8 + i klony swoiste dla wybranych regionów epitopów H5N1 i H3N2 Ze względu na stosunkowo wysokie stężenie peptydu wymagane dla IFN-y ex vivo Test ELISpot, rozpoznanie krzyżowe wielu peptydów przez sztuczną komórkę T wydawało się możliwe. W celu zbadania, czy odpowiedzi limfocytów T na peptydy H5N1 były funkcjonalne wobec białek wirusa H5N1 przetwarzanych w sposób naturalny, skonstruowano rVACV wykazujące ekspresję M1 lub NP H5N1 (H5N1 M1-VACV, NP-VACV). Autologiczne linie komórkowe B transformowane EBV (BCL) zostały zainfekowane przez te wirusy i użyte jako cele. rVACV wyrażające M1 lub NP ludzkich szczepów H1N1 (M1-VACV i NP-VACV) i szczep H3N2 (NP-VACV) (19, 21, 35) również były używane równolegle. Zakres krzyżowego rozpoznawania docelowych komórek zakażonych rVACV przez klony T CD4 + i CD8 + pochodzące od zdrowych osobników oceniano za pomocą testu uwalniania Cr, testu degranulacji CD107a i ICS (IFN-a, TNF-a, IL-2, i IL-4). Wysokie poziomy krzyżowej identyfikacji docelowych komórek zakażonych H5N1 M1-VACV lub NP-VACV były eksponowane przez wiele klonów T komórek CD4 + i CD8 +. Komórki zakażone VACV typu dzikiego nie zostały rozpoznane. Dobra zdolność cytolityczna była wykazywana przez krzyżowo reaktywne limfocyty T CD8 + nawet przy niskich stosunkach efektorowych do docelowych (reprezentatywne przykłady przedstawione na fig. 5, A i C). Wydaje się, że klony te są wysoce funkcjonalne, jednocześnie wydzielając cytokiny, takie jak IFN-y. i TNF-a sprzężony z regulacją w górę CD107a w rozpoznawaniu komórek docelowych wyrażających M1 lub NP szczepu H5N1, jak również szczepów ludzkich (reprezentatywne przykłady przedstawione na Figurze 5, B i D oraz Suplementową Figurze 2). Wysoce reaktywne krzyżowo klony komórek T CD4 +, takie jak klony M1 95. 112_ HUK21 (klon specyficzny dla M1 95. 112 i otrzymany od dawcy HUK21) i M1 241. 252_HUK01 również wykazywały wielofunkcyjne pojemności, wytwarzając wysokie poziomy cytokin, takich jak IFN-y. A, TNF-a i IL-2 po rozpoznaniu krzyżowym (Figura 5, E i F, i dodatkowa Figura 2). Nie wykryto produkcji IL-4. Figura 5 Funkcje efektorowe wyświetlane przez klony komórek T CD4 + i CD8 + po rozpoznaniu komórek docelowych zakażonych przez rVACV wyrażające H5N1 M1 lub NP. Reprezentatywne przykłady. (A i C) Test uwalniania 51Cr. Reakcje cytolityczne krzyżowo reaktywne z komórkami docelowymi zakażonymi H5N1 NP-VACV (A) lub H5N1 M1-VACV (C) eksponowanymi przez klony komórek T CD8 + swoiste dla NP 258. 273 (donor HUK21) (A) lub dla M1 58. 66 (dawca HUK01) (B)
[przypisy: zespół aspergera u dorosłych, zespół fallota, zespół aspergera test ]