psychiatra dziecięcy nowy sącz

Wszystkie linie komórkowe dały oczekiwane pasmo kb w monoterapii, z wyjątkiem Calu-3, które dawało głównie pasmo 1,3 kb, i SK-LU-1, które dawały prążki kb i 1,3 kb; gatunki 1,3-kb mogą również reprezentować mRNA z alternatywnym splicingiem dla pp75 w tych typach komórek. Stosując to samo oznaczenie RT-PCR, produkt RT-PCR kb z pp75 wykryto w mRNA z ludzkiego mózgu, nerki, wątroby, trzustki i jądra (dane nie przedstawione). W skrócie, wyrażenie pp75 wydaje się być wszechobecne i jest podobne do ekspresji zaobserwowanej dla SS-A / Ro 60 kDa. pp75 zlokalizowane głównie w cytoplazmie. Lokalizację subkomórkową pp75 w komórkach HeLa i HEp-2 badano za pomocą pośredniej mikroskopii immunofluorescencyjnej stosując królicze surowice odpornościowe anty-pp75 w rozcieńczeniu 1:50 lub 1: 100. Barwienie cytoplazmatyczne obserwowano w obu typach komórek w porównaniu z surowicami kontrolnymi przed immunizacją. Aby uzyskać niezależne oznaczenie subkomórkowej lokalizacji pp75, otwartą ramkę odczytu pp75 subklonowano i poddano fuzji z końcowym epitopem NH2 T7Tag w eukariotycznym plazmidzie ekspresyjnym i przejściowo transfekowano do komórek HeLa. Rekombinowany pp75 w transfekowanych komórkach wykrywano stosując mysie mAb anty-T7Tag i mikroskopię immunofluorescencyjną. Przede wszystkim obserwowano wybarwianie cytoplazmatyczne we wszystkich transfekowanych komórkach, chociaż obserwowano duże zróżnicowanie poziomu ekspresji (Figura 6). Figura 6 Transfekcja przejściowa cDNA pp75 wykazała ekspresję cytoplazmatyczną w komórkach HeLa. Konstrukt ekspresyjny sterowany CMV promotora dla białka PP75 znakowanego epitopem transfekowano do komórek HeLa i obserwowano po inkubacji przez noc. Zrekombinowane białko zidentyfikowano głównie w cytoplazmie transfekowanych komórek (strzałki) z słabym do silnego zabarwienia, podczas gdy nietransfekowane komórki (groty strzałek) dawały wybarwienie tła jądrowego z mAb T7tag. Autoprzeciwciało do pp75 w surowicy od matek dzieci z NLE i SS. Ponieważ autoprzeciwciała są często wykrywane przez białka tworzące kompleksy makromolekularne (33), rekombinowane białko z pp75 (aa105. 653) zostało użyte jako substrat do ustalenia testu ELISA w celu określenia częstości autoprzeciwciał względem pp75 w surowicach matek dzieci z NLE. Czternaście (16,67%) z 84 próbek surowicy od matek dzieci z NLE i 5 (6,25%) z 80 próbek od pacjentów z SS, miało wykrywalne autoprzeciwciała większe niż 3 SD powyżej średniej dla 30 surowic od normalnych (Figura 7a). Pozytywne surowice zostały potwierdzone metodą Western blot z użyciem rekombinowanego pp75 jako substratu (Figura 7b) i testu immunoprecypitacji z użyciem produktu translacji in vitro (dane nie pokazane). Nie obserwowano żadnych reaktywności w przypadku normalnych ludzkich surowic w analizie Western blot i immunoprecypitacji. Figura 7 Ludzkie autoprzeciwciało do rekombinowanego pp75 w surowicach matek dzieci z NLE i pacjentów z SS. (a) Osiemdziesiąt cztery surowice od matek dzieci z NLE, 80 surowic od pacjentów z SS i 30 normalnych ludzkich surowic analizowano pod względem autoprzeciwciał na rekombinowany pp75 (aa105. 653) w formacie ELISA. Okręgi pokazują reprezentatywny zestaw danych dla każdej próbki, a linia kreski jest wartością odcięcia obliczoną jako średnia. 3 SD. Wykonano co najmniej 3 powtórzenia testu ELISA. (b) Reprezentatywny Western blot wykazujący reaktywność 9 ELISA pozytywną wśród surowic NLE z rekombinowanym końcowym fragmentem 29-kDa z pp75 (aa465. 653). OD, gęstość optyczna. Spośród 14 seropozytywnych matek 4 są bezobjawowe, 4 u których zdiagnozowano SLE, 2 mają SS, 2 mają SLE / SS, a 2 mają niezróżnicowaną chorobę autoimmunologiczną. Trzynaście matek miało dzieci z objawami kardiologicznymi samego NLE i z samą chorobą skórną; jednak jedna z matek, których surowica wyraźnie reagowała z pp75, nie posiadała przeciwciał anty-SS-A / Ro lub SS-B / La za pomocą testu ELISA lub metody Western blot. Dyskusja Wśród autoprzeciwciał autoantygenów opisanych w układowej chorobie reumatycznej, autoprzeciwciała przeciwko SS-A / Ro są wyjątkowe, ponieważ są silnie związane z NLE, podostrym skórnym toczniem i SS (32, 34)
[hasła pokrewne: zespół aspergera u dorosłych, zapalenie ucha u dziecka objawy, zapalenie przyzębia ]