Zachorowalność na dziedziczny polineuropatologiczny rak jelita grubego i możliwość przeprowadzenia badań molekularnych w kierunku choroby czesc 4

Chromatogramy sekwencji analizowano za pomocą oprogramowania Factura and Sequence Navigator (Applied Biosystems) .34 Ryc. 1. Ryc. 1. Podejście stosowane do identyfikacji dziedzicznego raka płaskonabłonkowego bez polipowatości u pacjentów z niedawno zdiagnozowanym rakiem jelita grubego. Mutacja jest mutacją założycielską, której nie można wykryć metodami stosowanymi do znalezienia mutacji w MLH1 i MSH2.
Oprócz powyższego, próbki normalnej tkanki od wszystkich 509 pacjentów analizowano za pomocą metody 35 opartej na PCR35 niezależnie od statusu błędu replikacji dla wspólnej mutacji założycielskiej, określanej jako mutacja 1, której nie można wykryć za pomocą metod analitycznych opisanych powyżej. (Rysunek 1). Składa się z delecji genomowej 3,5 kb zawierającej ekson 16 MLH1 i jak dotąd zidentyfikowano ją w ponad 30 rodzinach w Finlandii i Szwecji.35-37
Wyniki
Na podstawie danych z Fińskiego Rejestru Nowotworów szacujemy, że zbadaliśmy około dwóch trzecich wszystkich pacjentów ze świeżo zdiagnozowanym rakiem jelita grubego w uczestniczących ośrodkach. Spośród 509 próbek raka jelita grubego 63 (12 procent) miało błędy replikacji (Tabela 1). Odsetek guzów z błędami replikacji był bardzo podobny w obu metodach stosowanych do wykrywania takich błędów: 13 procent (31 guzów) w 236 próbkach analizowanych za pomocą odczynników radioaktywnych i 12 procent (32 guzy) w 273 próbkach analizowanych za pomocą znakowania fluorescencyjnego.
Aby dokładnie zbadać całą serię 509 nowotworów, użyliśmy BAT-26, bardzo czułego markera mikrosatelitarnego dla błędów replikacji DNA.27,28 Ogółem 64 guzy wykazały niestabilność genetyczną względem markera BAT-26. Spośród nich 58 było wśród 63 próbek, które uznano za pozytywne w przypadku błędów replikacji z wieloma markerami. Sześć próbek uznanych za negatywne w przypadku innych rodzajów testów było dodatnich w badaniu BAT-26: 2 należały do 236 próbek testowanych metodą radioaktywną, a 4 do 273 próbek testowanych za pomocą znakowania fluorescencyjnego. Z 31 próbek uznanych za pozytywne za pomocą metody radioaktywnej, 3 były negatywne w teście BAT-26, a 2 z 32 pozytywnych próbek wykrytych metodą fluorescencji były negatywne w testach BAT-26.
Tabela 2. Tabela 2. Charakterystyka 10 pacjentów z mutacjami linii germ-line. Analiza mutacji DNA prawidłowej tkanki (źródło będące normalną śluzówką okrężnicy odległej od nowotworu lub limfocytów krwi) zidentyfikowało 10 jednoznacznych mutacji linii zarodkowej. Dwie z tych mutacji zostały ujawnione przez dwuwymiarową elektroforezę DNA i sekwencjonowanie, 29 przez bezpośrednie automatyczne sekwencjonowanie i pięć przez test na mutację 1. Próbka od jednego pacjenta (Pacjent 115), który miał wcześniejszego raka okrężnicy, była przeanalizowano go dokładniej i wykazano, że ma on delecję eksonów MLH1 3, 4 i 5 w komplementarnym DNA.38 Zatem całkowita liczba mutacji linii zarodkowej wynosiła 10 (2,0%) (Tabela 2). DNA od sześciu pacjentów, których nowotwory były negatywne pod względem błędów replikacji podczas wstępnego badania, ale było dodatnich w testach BAT-26, również zostało zsekwencjonowanych, a żadna z sekwencji nie zawierała mutacji MSH2 lub MLH1.
Wiele wcześniej opisanych polimorfizmów w MLH1 i MSH2 oraz trzy pozornie neutralne intronowe warianty sekwencji w MLH1 wykryto również w próbkach tkanek normalnych (453 + 79A . G, 885-24T . A i 2104-8A . T)
[więcej w: dronedaron, Choroba Perthesa, bikalutamid ]
[podobne: zapalenie przyzębia, zapalenie ucha u dziecka objawy, olx strzelce kraj ]